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如何避免胎牛血清使用時出現(xiàn)黑點

更新時間:2021-06-27      點擊次數(shù):1186
  在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清,最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜,影響后續(xù)實驗的結(jié)果,我們在實驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞,效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清,要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。
  為防止客戶由于操作方面而使黑點生成的辦法。對此一定要做好以下幾點。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。
  (1)盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
  (2)培養(yǎng)基無需37℃水浴。
  (3)培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。
  (4)嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗。
  (5)掌握細(xì)胞傳代的時機,細(xì)胞切勿生長過老。
  1、化凍將血清從-20度冰箱中取出,室溫(或浸于自來水中)化凍(約需要30分鐘至2小時,也可放于4度冰箱化凍過夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時保存)
  2、滅活
  (1)放入室溫的水浴鍋內(nèi)開始加熱(同時放入一個空的血清瓶,內(nèi)裝100ml自來水,插入一根溫度計,溫度監(jiān)控以此為準(zhǔn))
  (2)當(dāng)溫度計顯示56度時,停止加熱,改為間斷加熱,維持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過56度,則:若仍未超過60度,且時間很短,比如不超過5分鐘,則仍可使用;若超過60度,或者時間較長,則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細(xì)胞的培養(yǎng))
  (3)取出,自然冷卻至室溫(約需1-3小時),可分裝或-20度繼續(xù)凍存。
  3、分裝
  (1)轉(zhuǎn)入無菌間,在超凈臺內(nèi)將血清分裝入10ml離心管中(注意預(yù)先要將血清輕輕搖動數(shù)周、混勻;用吸液管或吹大管吹出血清時要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產(chǎn)生氣泡;如果產(chǎn)生氣泡,則在酒精燈火焰上過一下))
  (2)放入-20度冰箱凍存
  (3)全部操作約需要4-6小時
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